小鼠miRNA芯片检测试剂

小鼠miRNA芯片检测试剂

详细信息

         microRNAs (miRNAs)是非编码的小分子, 30%哺乳动物的基因由miRNAs调控。 到目前为止,小鼠的染色体上已确定有数百种 miRNAs,其中许多miRNA只相差一个或者几个核苷酸。 成熟miRNAs的表达是组织特异的。miRNAs丰度可相差几个数量级。中帜生物小鼠芯片可检测119种小鼠的miRNAs。
A. 优点:
        中帜生物基于其自有的T7-OLA(oligo Ligation Assay)专利技术提供的miRNA芯片具有以下优点:
· 分辨力强——能分辨所有同源的miRNA ,所有同源的let7可清楚分辨
· 线性扩增——捕获的miRNAs被T7转录扩增,没有PCR扩增引入的偏差
· 勿需预纯化——总RNA可以直接进行分析,勿需预分离
· 操作简单——步骤简单、流畅
B. 原理:
        miRNA在三个方面与信使核糖核酸不同:(1) miRNAs是相当小的分子,丰度差异较大 (2)成熟miRNAs与其前体pre-miRNA和primiRNA共存,只是长度不同(3)许多miRNAs序列非常接近,例如同源分子,只是一个或几个核苷酸不同。所以,常规芯片技术不能直接用于分析这些分子。一些miRNA芯片产品市面上也可买到,但这些产品或者繁琐需预分离microRNA,或者缺乏分辨力不能区分同源之间的差异,或者对低丰度的miRNAs不够敏感。

        对每一个miRNA分子,有二条引物(oligo)来识别,每个引物只识别miRNA一半的序列。其中的一个引物中含有标示序列(Tag),另外一个引物含有T7启动子序列。只有序列完全匹配的时候,两个引物才能和miRNA杂交,形成RNA/DNA的杂合体。即使只有一个核苷酸不匹配都会造成杂交或者连接失败。这也是T7-OLA技术的产品可分辨同源miRNA的原因。为了增加分子的稳定性,该DNA/RNA杂合体被延伸了一段序列(加入的另一对寡核苷酸与上述引物在T7和Tag部位互补)。含有生物素(biotin,B)的短序列通过互补结合到其中的一个引物上。通过结合有亲和素(Streptavidin)的磁珠分离出杂合体。然后,两个引物在T4连接酶的作用下,被连接成一个DNA片断。随后经过线性扩增(转录),含有生物素的UTP整合到RNA序列中。把转录好的RNA序列和预先准备好的含有不同miRNA序列的膜,进行杂交。最后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素进行反应,加入发光底物测定。
        中帜生物小鼠miRNA芯片试剂测定119个鼠miRNAs及其同源的表达。步骤简单、流畅,包括三步: (1) 含有miRNA的样品与提供的引物混合,形成RNA/DNA(miRNA/oligo)的杂合体(2)选出杂合体,除去游离的寡核苷酸,在miRNA引导下两个引物连接成一个DNA片断(3)通过T7转录,扩增连接的DNA片断。


产品名称规格编号
小鼠miRNA芯片检测试剂3张膜AP-0005

 

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